可是对于从事核酸检测的实验室人员内心一直渴望一种终极的核酸气溶胶污染解决方案:对核酸气溶胶污染的房间进行空气核酸清除。这个实验我从构思到断断续续的实验用了差不多1年的时间,这期间也有和很多朋友进行交流,最终形成下面的实验方案。
一、DNA去除剂的筛选
要实现核酸气溶胶污染的空间清除,首先要筛选出在液体状态下可以去除核酸的DNA去除剂。因为真正管用的DNA去除剂也不多。
本次试验将经过数字PCR定量的100 copies/μL (CT约为31)ASFV质粒与DNA去除剂按照等体积混合,室温分别作用10min,20min和30min,进行核酸提取后,进行qPCR扩增,与质粒和水混合的阳性对照进行比较。由于并非同一次实验完成,所以结果之间可能存在一定的偏差,但是不影响试验的结论。到目前为止我一共评价了10种市售DNA去除剂产品,只有1号,6号和8号产品在液体状态下可有效降解质粒DNA,其他产品几乎无任何效果。
表1 市售DNA去除剂的核酸去除效果
二、常用消毒剂的DNA去除效果实验
1.常用消毒剂的筛选
实验室中常用的消毒剂种类众多:醛类、酚类、醇类、季铵盐类、过氧化物、氯制剂以及酸碱,这些消毒剂对微生物的消毒效果已经经过充分的实验验证,但是对于核酸的降解效果尚没有充分的实验数据。对于核酸检测实验室需要一种既对微生物的消毒效果好同时又能降解DNA的消毒剂。试验结果表明,仅84消毒液和三氯异氰尿酸两种氯制剂和1 M盐酸符合要求。由于1 M盐酸具有较强的腐蚀性,重点推荐氯制剂作为核酸检测实验室的废弃物处理,但是氯制剂具有金属腐蚀性,不能用于仪器设备的消毒。
表2 不同类型消毒剂的DNA去除效果
2.氯制剂的最低有效浓度
氯制剂类消毒液具有强大的DNA降解作用,但是由于其有金属腐蚀性和刺激性,使用时可用于清洁地面,非金属台面以及浸泡吸头、离心管等试验物品。
根据《新冠肺炎疫情消毒技术指南 》:污染物(患者血液、分泌物和呕吐物)有效氯 5g/L-10g/L 的含氯消毒液;地面、墙壁、物体表面使用有效氯 1g/L 的含氯消毒液;衣服、被褥等纺织品先用有效氯 0.5g/L 的含氯消毒液浸泡 30 分钟,然后按常规清洗。
表3 氯制剂消毒液不同浓度的DNA去除效果
试验结果表明:作用5min时,有效氯浓度大于等于1.2 g/L的含氯消毒液,可将100 copies/μL质粒完全降解。作用10min时,有效氯浓度大于等于0.6 g/L的84消毒液,可将100 copies/μL质粒完全降解。